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黄曲霉毒素(B1) 【名称】黄曲霉毒素(B1)
【英文名称】Aflatoxin (B1)
【品牌】美国AFFINITECH
【货号】AFL-B1-0100
【规格】96*1/盒

实验原理

将优化的与B1反应的黄曲霉毒素特异性抗体包被在聚苯乙烯微孔中。将谷物提取物加入到微孔中,孵育后与黄曲霉毒素 B1抗原竞争性结合,样品中的黄曲霉毒素B1抗原与微孔中的α-黄曲霉毒素B1结合,形成黄曲霉毒素B1抗体-抗原复合物,洗去没有结合的部分,加入酶底物。底物与酶标记的抗原-抗体复合物反应,形成蓝色产物。最后一步反应终止后,颜色从蓝色变成黄色,且稳定不变。在450nm处测定光度值。

使用目的

黄曲霉毒素B1试验是竞争性酶联免疫反应,用于定量检测谷类、坚果、棉籽或其他动物饲料产品中的黄曲霉毒素B1。

实验步骤

1. 使用前所有的试剂恢复至室温。

2. 将洗液粉末溶于0.5L的去离子水中,不用时冰箱保存。

3. 在混合板中加入200µl的样品稀释液,然后对应加入100µl处理好的待测样品或对照品。反复吹打混匀。**配方奶粉需要另外的样品稀释液。

4. 吸取100µl稀释好的标准品和样品到包被抗体的微孔中。

注意:在实验过程中实验员必须标记每个标准品和样品的位置。

5. 室温下孵育30分钟。

6. 将内容物倒入废液瓶中,用1×的洗液每孔加入300µl,清洗3次。如有需要拍掉多余水分。在操作过程中不能使微孔干燥。将微孔口朝下在吸水纸上拍打,去除剩余的水。

7. 每个孔中加入100µl的酶结合物,室温下避光孵育30分钟。

8. 将内容物倒入废液瓶中,按照步骤 6 清洗。

9. 在每个孔中加入2滴(或100µl)的TMB底物。室温下避光孵育10分钟。

10. 在每个孔中连续加入2滴(或100µl)的终止液。

11. 利用酶标仪,在450nm处测定并记录每个孔的吸光度值( OD )。

结果判读

利用原始的OD值(0.0)或相对于0ppb黄曲霉毒素标准品OD值的百分比(%B/Bo)建立剂量-反应曲线。利用标准曲线计算待测值。