禽病诊断试剂盒 猪病诊断试剂盒 牛羊病诊断试剂盒 病原学诊断试剂 霉菌毒素试剂盒

呕吐毒素(Don) 【名称】呕吐毒素(Don)
【英文名称】Deoxynivalenol
【品牌】美国AFFINITECH
【货号】DON-0100
【规格】96*1/盒

实验原理

脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)是一种固相直接竞争酶联免疫分析法。将脱氧雪腐镰刀烯醇特异性抗体包被在聚苯乙烯微孔中。用蒸馏水或去离子水从研磨样品中提取毒素。提取的样品与辣根过氧化酶标记的DON混合,加入到抗体包被的微孔中。提取物中的DON与酶标记的DON竞争性的结合微孔中包被的抗体。通过洗涤弃去微孔中没有特异性反应的内容物。加入酶底物进行染色(蓝色),颜色的深浅与酶结合物的量呈正比,与样品中或标准物中的DON的浓度呈反比。因此,随着样品或标准物中的DON浓度的增加,蓝色越浅。加入终止液后,颜色由蓝色变成黄色。在酶标仪的450nm处测定吸光度值。将样品的OD值与试剂盒中的标准品的OD值相比,然后判读样品结果。

使用目的

脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)实验是竞争性酶联免疫反应,用于定量检测谷类或其他动物饲料产品中的脱氧雪腐镰刀烯醇。

样品的准备

注意:必须根据建立的采样方法采集样品

1.   将样品磨碎至能够即溶的颗粒(95%的能够通过20目的网筛)

2.   秤取20g磨碎的样品,加入100ml的蒸馏水或去离子水,样品稀释度为1:5(w/v)。

3.   在密闭的容器或搅拌机中震荡混合至少3分钟。

4.   待颗粒沉降后将5-10ml的提取物用Whatman1号滤纸过滤,收集滤液待测。

5.   将1ml的样品提取物与9ml的洗液混合,将样品按1:10的比例稀释

6.   样品最终按1:50的比例稀释后待用。

7.   标准品使用前不需稀释。

实验步骤

注意:建议采用多道的移液器进行实验。如果使用单道的移液器,建议样品和标准品总共不超过16个(2条)

1. 使用前所有的试剂恢复至室温。用蒸馏水轻轻将PBS-Tween的小包内容物冲入0.5升的容器内,用蒸馏水配成0.5升,不使用时放入冰箱保存。

2.   每个标准品和样品用1个稀释孔,放置在微孔架上。放置相同数量的抗体包被的微孔在微孔架上

3.   每个稀释孔中加入200µl的酶结合物。

4.   向稀释孔中加入100µl的标准品和样品,每孔换新枪头。用移液器反复吹打至少3次,使内容物混匀。

注意:在实验过程中实验员必须标记每个标准品和样品的位置。

5.   吸取稀释孔中100µl的内容物加入到与之对应的抗体包被微孔中,每孔换新枪头。室温下孵育15分钟。如果有需要,稀释孔内有足够的液体,用于标准品或样品的重复检测。

6.   将内容物倒入废液瓶中,每个微孔加满PBS-吐温溶液,清洗微孔,然后将微孔中的水倒入废液瓶中。反复清洗5次。

7.   将微孔口朝下在吸水纸上拍打,去除剩余的水。

8.   在每孔中加入2滴(或100µl)的TMB底物。室温下避光孵育5分钟。

9.   每个微孔中连续加入2滴(或100µl)的终止液。按照与加入底物相同的顺序相同的位置,加入终止液。

10. 利用酶标仪,在450nm处测定并记录每个微孔的吸光度值(OD)。

结果判读

利用原始的OD值或相对于0ppm呕吐毒素标准品的OD值的百分比建立剂量-反应曲线。利用标准曲线计算待测值。