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玉米赤霉烯酮 【名称】玉米赤霉烯酮
【英文名称】Zearalenone
【品牌】美国AFFINITECH
【货号】ZEA-0100
【规格】96*1/盒

实验原理

本玉米赤霉烯酮的试剂盒采用固相直接竞争酶免疫分析法,用于与玉米赤霉烯酮充分反应的玉米赤霉烯酮的特异性抗体包被在聚苯乙烯微孔中。用70%的甲醇从研磨样品中提取毒素。如果样品中含有玉米赤霉烯酮,将与包被的抗体结合。随后,加入与辣根过氧化酶标记的玉米赤霉烯酮,未与样品或者标准液中的玉米赤霉烯酮反应的特异性抗体结合。孵育一段时间后,将孔内液体倒出并洗涤,加入辣根过氧化酶的底物(遇辣根过氧化酶变成蓝色),颜色的深浅与标记的辣根过氧化酶的玉米赤霉烯酮量呈正比例,与样品或标准物中的玉米赤霉烯酮的浓度呈反比例。因此,随着样品或标准物中的玉米赤霉烯酮浓度的升高,蓝色将越浅。加入终止液后,颜色由蓝色变成黄色。在酶标仪的450nm处测定吸光度值。将样品的OD值与试剂盒中的标准品的OD值相比,然后判读样品结果。

使用目的

玉米赤霉烯酮ELISA是竞争性酶联免疫反应,用于定量检测谷类中的玉米赤霉烯酮的含量,如玉米、大麦、燕麦、小麦、大米和高粱,也可用于检测面包中的玉米赤霉烯酮的含量。

样品准备

注意:必须根据建立的采样方法收集样品

1. 制备提取液(70%甲醇或80%乙腈),将30ml的蒸馏水或去离子水加到70ml化学纯的甲醇中,或         者20mL的蒸馏水或去离子水加到80mL化学纯的乙腈中用于加入到每个检测样品中。

2. 将样品磨碎至能够即溶的颗粒(50%的能够通过20目的网筛)

3.秤取20g磨碎的样品,加入100ml提取液。注:样品与提取液的比例为1:5(w/v)

4. 在密闭的容器或混合器上震荡混合3分钟。

5. 颗粒沉降后将5-10ml的提取物用Whatman1号滤纸过滤,收集滤液待测。

6. 用70%甲醇将样品按1:10的比例稀释(例如:0.1ml+0.9ml)

7. 稀释过的样品可用于试验,最终稀释率为1:50

8. 标准品使用前不需要稀释。

实验步骤

注意:建议采用多道的移液器进行试验。如果使用单道的移液器,建议样品和标准品总共不超过16个(2条)

1. 使用前所有的试剂恢复至室温,制备洗液,用蒸馏水轻轻将PBS-Tween的小包内容物冲入0.5升的容器   内,用蒸馏水配成0.5升,不使用时放入冰箱保存。

2. 每个标准品和样品用1个稀释孔,放置在微孔架上。放置相同数量的抗体包被的微孔在微孔架上

3. 每个稀释孔中加入200µl的样品稀释液。

4. 向对应的稀释孔中加入100µl的标准品和样品,每孔换新枪头。用移液器反复吹打至少3次,使内容物混匀。 注意:在实验过程中实验员必须标记每个标准品和样品的位置。

5. 吸取稀释孔中100µl的内容物加入到与之对应的抗体包被微孔中,每孔换新枪头。室温下孵育10分钟。 如果有需要,稀释孔内有足够的液体,用于标准品或样品做重复检测。

6. 每个孔中加入100µl的酶结合物,加入酶结合物之前不能将孔内容物倒掉或清洗,将内容物充分混合,   室温下孵育10分钟。

7. 将内容物倒入废液瓶中,每个微孔加满PBS-Tween洗液,清洗微孔,然后将微孔中的水倒入废液瓶中。 反复清洗3次。

8. 将微孔口朝下在吸水纸上拍打,去除剩余的水

9. 加入2滴或100µl的TMB底物加入到每个抗体包被孔中,室温避光孵育10分钟。

10.每个微孔中加入2滴(或100µl)的终止液。按照与加入底物相同的顺序相同的位置,加入终止液。

11.利用酶标仪,在450nm处测定并记录每个微孔的吸光度值(OD)。

结果判读

利用原始的OD值或OD值与无玉米赤霉烯酮的标准值的百分比建立剂量-反应曲线,利用标准曲线计算待测值。