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T2 毒素 【名称】T2毒素
【英文名称】T2 Toxin
【品牌】美国AFFINITECH
【货号】T-2-0100
【规格】96*1/盒

实验原理

T-2毒素试剂盒是一种竞争性酶联免疫分析法。将研磨样品与70 %的甲醇震荡提取T-2毒素。提取物过滤,并进行免疫分析。然后加入T-2毒素辣根过氧化物酶结合物,随后加入T-2毒素抗体开始反应。孵育10min后,样品中的T-2毒素与 T-2毒素辣根过氧化酶结合物竞争性与检测孔中的T-2毒素抗体。孵育 10 min 后,弃去内容物,吸取未结合的酶标记毒素。加入显色底物,酶与毒素结合物显蓝色。孵育5min,反应终止,测定每个孔的颜色。未知样品的颜色与校准物的颜色相比,得出样品中T-2毒素的浓度。

使用目的

T-2毒素试剂盒是竞争性ELISA反应,用于定量检测玉米、玉米粉、玉米胚芽粉、玉米麸粉和玉米大豆粉中的T-2毒素。

样品及标准品的准备

注意:必须根据建立的采样方法采集样品

1. 准备提取溶液(70%甲醇):70 ml的甲醇中加入30 ml的蒸馏水或去离子。

2. 将样品磨碎至能够即溶的颗粒(50%的能够通过20目的网筛)。

3. 秤取 20g磨碎的样品,加入100ml的提取溶液(70%甲醇)。

4. 在密闭的容器或搅拌机中震荡混合2-3分钟。待颗粒沉降后,将15ml的提取物用Whatman1号滤纸过滤,收集滤液待测。

5. 将样品与标准品按1:10的比例用蒸馏水或去离子水稀释。(注意:由于谷物样品在提取的时候已经按1:5稀释,因此标准品实际上是设定值的1/5,最初的谷物样品浓度不需要进一步的回调)

实验步骤
注意:建议采用多道的移液器进行实验。如果使用单道的移液器,建议样品和标准总共不超过16个(2条)。(注意:对校正品和样品设置重复孔可以提高实验的精确度)

1. 使用前所有的试剂恢复至室温。

2. 将使用的测试孔放置在微孔架上。确保未使用的微孔放入有干燥剂的自封袋中。

3.  每个稀释孔中加入50µl的酶结合物。

4. 向稀释孔中加入50µl的按1:10稀释的标准品和样品,每孔换新枪头。注意:在实验过程中实验员必须标记每个标准品和样品的位置。

5. 每个孔中加入50µl的兔抗T-2抗体溶液。

6. 室温孵育10min

7. 将内容物倒入废液瓶中,每个微孔加满蒸馏水或去离子水,清洗微孔,然后将微孔中的水倒入废液瓶中。反复清洗5次。

8. 将微孔口朝下在吸水纸上拍打,去除剩余的水。期间不能使微孔风干。

9. 在每孔中加入2滴(或100µl)的底物。室温下孵育5分钟。

10. 每个微孔中马上加入2滴(或100µl)的终止液。按照与加入底物相同的顺序相同的位置,加入终止液。

11. 利用酶标仪,在450nm处测定并记录每个微孔的吸光度值(OD)。

结果判读

定量判读需要在半对数坐标纸上绘制标准品的吸光度值(Y轴)与标准品浓度(X轴)的坐标图。将标准品的点连成直线,样品的吸光度就在线上,与之对应的X轴上的点就是样品的浓度。样品的吸光度小于最高的标准值时记为>500ppb